王海滨 姜平 曾珍 范荣 毛远丽 鞠连才 刘佳 李永利 刘振红 杨静 刘志国 洪炜 张晶 郭静霞 崔恩博 刘立明 刘庆峰 程炳立 马洪滨 付体权
作者单位：100039 北京，解放军第三○二医院临检中心(王海滨、姜平、毛远丽、鞠连才、刘佳、李永利、刘振红、杨静、刘志国、洪炜、张晶、郭静霞、崔恩博、刘立明、刘庆峰、程炳立、马洪滨、付体权)，SARS病区(曾珍、范荣)
传染性非典型肺炎（SARS）患者具有许多特征性的临床表现，如高热、全身中毒症状起病，发病后血循环中的淋巴细胞绝对数量随病情加重而显著下降，血清免疫球蛋白IgG和IgA含量进行性降低以及年长患者重症SARS发生率及病死率较高等特点［1］。SARS可能是一种由病毒“超抗原”引起的“急性免疫损伤性疾病”；免疫损伤和免疫清除的相互消长，可能是影响SARS病程发展的重要因素。红细胞膜表达有数量众多的补体一型受体（CR1）［2］，是机体黏附、运输及辅助清除循环免疫复合物等免疫产物的重要物质［3］，同时也是红细胞具有天然免疫黏附现象的主要物质基础［4］。本文对解放军第三○二医院住院确诊65例SARS病例及27例疑似病例的红细胞天然免疫黏附功能（EIIAF）进行动态研究。现报道如下。
一、对象与方法
1．对象：（1）SARS患者：均为2003年3月至6月在解放军第三○二医院临床确诊的患者，共65例。其中男29例，女36例，年龄为10~74岁，平均年龄为27.8岁。诊断依据卫生部新颁布
的SARS临床诊断标准，疑似病例27例。（2）其他呼吸道传染病对照18例，其中，麻疹8例，风疹6例，流行性腮腺炎4例，相应血清IgM抗体阳性确诊。（3）合并糖尿病的SARS患者1例，合并慢性肝炎的SARS患者2例。正常对照组50例来自本院输血科正常献血员。
2．病情分期：根据患者病情严重程度及缺氧程度将SARS患者分为如下6期。（1）发病初期：初始发病，中度发热、全身不适，尚无肺部影像学变化及呼吸困难等症状。（2）急性期：高热不退、呼吸急促，淋巴细胞绝对值下降并出现肺部阴影，使用激素治疗。（3）进展期：高热不退、双肺炎症病变，呼吸困难，吸氧3~5 L/min，血气PO2下降在60 ~80 mm Hg（1 mm Hg = 0.133 kPa）之间，淋巴细胞绝对值下降到正常水平的一半以下。（4）极期：低氧血症，血气PO2低于60 mm Hg，激素治疗效果较差，双肺炎性渗出较重，开始出现急性成人呼吸窘迫综合征(ARDS)，死亡，多脏器功能损害（MOFS）。（5）恢复前期：肺部阴影明显吸收，血气PO2低于60 mm Hg回升到80 mm Hg以上，病人自我感觉明显好转。（6）恢复期：肺部炎症完全消失，血气PO2恢复至正常水平。外周血淋巴细胞绝对数恢复到正常水平和接近正常水平。
3．EIIAF快速检测方法：枸橼酸钠抗凝全血2 ml，取自肘静脉，1 500 r/min水平离心5 min，取100 μl病人血浆和1 μl沉淀的红细胞，直接加到150 μl新鲜配制的定量靶细胞悬液中，混匀，37℃，水浴30 min。加200 μl固定缓冲液，轻轻混匀，5 min后阅片。阅片要求：取混匀液150 μl加50 μl吉氏染液，悬浮涂片（玻片的2/3），取四个角和中心五区阅片，每区阅读20个靶细胞，结合5个及以上红细胞的靶细胞为一个黏附单位，计算黏附率。
4．血细胞分类：采用ACL7000血细胞分析仪进行血细胞计数及分类，采用全自动血沉仪进行血沉测定。
5．统计学分析：使用Excel计算机软件，数据用 ±s表示。采用平均值的成对二样本分析t检验。
二、结果
1．SARS急性期EIIAF的变化：65例确诊的SARS患者，在起病3 d内即出现EIIAF的显著下降，EIIAF平均以10％～30%/d的速度下降。而风疹、麻疹及流行性腮腺炎等患者，其EIIAF无前述典型变化。
2．EIIAF与SARS病情发展的关系(表1)：在进展期和极期的SARS患者，其EIIAF下降到较低水平。SARS患者在死亡前其EIIAF接近消失(表1)。
表1 SARS急性期、恢复期、死亡、疑似病例与正常人群的比较( ±s,%)
SARS分期
例数
EIIAF
P值
急性期
65
31±14
<0.001
恢复期
37
67±19
>0.05
死亡
4
6±4
<0.001
疑似病例（非SARS）
21
56±15
>0.05
健康人群
50
61±16
注：*与健康人群比较
3．EIIAF与淋巴细胞绝对值的比较：研究表明，SARS患者EIIAF的变化与淋巴细胞绝对值明显相关（r=0.55），大多重症SARS患者的EIIAF变化与淋巴细胞绝对数量的变化基本同步，但恢复期患者的EIIAF回升时间亦早于淋巴细胞绝对值恢复。
4．EIIAF与血沉变化的比较：临床研究发现，重症SARS患者的病情变化与血沉密切相关，病情重者血沉明显增快。对13例重症SARS患者的血沉结果与其EIIAF变化进行相关比较表明，EIIAF的下降与血沉的升高显著负相关（r=-0.54）。
5．SARS疑似病例EIIAF的变化特点：对27例疑似SARS发热患者的EIIAF进行动态检测，表明，5例EIIAF进行性下降的疑似病例，全部临床确诊为SARS。而21例EIIAF无显著变化的发热
患者则全部排除诊断。
6．SARS患者合并其他疾病时其EIIAF的变化特点：1例合并糖尿病的SARS患者其EIIAF持续处于正常人平均水平，但临床病情较重，进入临床恢复期后其EIIAF却较以前显著下降， 2例合并慢性肝炎的SARS患者其EIIAF持续表现为低水平但病情一直较轻。
目前虽然已明确SARS的病原体是新型冠状病毒［5］，国内业已研制出能够应用于临床检测的SARS病毒抗体检测试剂盒，为SARS的进一步确诊提供重要帮助，但SARS病情发展快速，年长者病死率高，SARS抗体的出现似与病情的缓解无明显关系。因此研究评估SARS病情变化的检测指标，对临床治疗有重要的指导意义。成熟红细胞表达有数量众多的CD35/CR1、CD44、CD58及IL-8R等物质，在辅助机体免疫清除（CR1）、调节炎症反应强度（CD44、IL-8R）及维持整体免疫功能的稳定等方面具有非常重要的作用［6］，因此研究红细胞的黏附、辅助清除病原的功能状况，对判断SARS病情发展变化具有重要价值。
本文研究结果表明，SARS患者EIIAF的变化与SARS患者的血沉显著负相关，与其淋巴细胞绝对值的变化显著正相关，提示SARS是以免疫损伤和免疫清除相互消长的疾病，这一推测支持“SARS存在相关抗体”的研究报道［7］。因此，SARS患者机体免疫反应产物的积聚及其量的变化与临床病情严重程度密切相关。风疹、麻疹及流行性腮腺炎等呼吸道传染病无SARS典型的EIIAF变化，除提示二者发病机制不同外，同时对疑似病例的排除有重要帮助。SARS患者合并糖尿病后病情迁延较重而EIIAF变化不显著，合并慢性肝炎者其EIIAF处于低水平但病情较轻，提示影响SARS病情发展的因素较多，值得深入研究。
参考文献
1 Zhao ZW, Zhang FC, Xu M, et al. The analysis of 190 cases of SARS in Guangzhou. Natl Med J China, 2003, 83:713－718.
赵子文，张复春，许敏，等. 广州地区2003年春季传染性非典型肺炎190例临床分析.中华医学杂志，2003,83:713－718.
2 Nelson RA. The immune adherence phenomenon. Science, 1953, 118: 733－735.
3 Tausk F, McCutchan J, Spechko P, et al. Altered erythrocyte C3b receptor expression, immune complexes, and complement activation in homosexual men in varying risk groups for acquired immune deficiency syndrome. J Clin Invest，1986 , 78：977－982.
4 Wang HB, Zhang JP, Guo F, et al. The phenomena and the Significance of Erythrocytes lymphocytes and granulocytes immune－adhering tumor cells in self－plasma.Chinese J Microbiol Immunol, 2001,21：263－266.
王海滨, 张景萍,郭峰.血细胞天然免疫黏附肿瘤细胞的现象及意义.中华微生物学和免疫学杂志,2001,21:263－266.
5 Peiris JSM, Chu CM, Cheng VC, et al. Clinical progression and viral load in a community outbreak of coronavirus－associated SARS pneumonia: A prospective study ［J］. Lancet, 2003,361:1767－1772.
6 De Winter RJ, Manten A, Se Jong YP, et al. Interleukin8 released after acute myocardial infarction is mainly bound to erythrocytes. Heart, 1997, 78 : 598－602.
7 Cheng Y, Zheng Y, Chen H, et al. The discovery and the significance of the related antibody in patients with SARS. Chinese J Microbiol Immunol ,2003,23:325－326.
程云,郑宇,陈昊.严重急性呼吸道综合征病人血清中SARS相关抗体的发现和分析.中华微生物学和免疫学杂志,2003,23:325－326.
王海滨 姜平 曾珍 范荣 毛远丽 鞠连才 刘佳 李永利 刘振红 杨静 刘志国 洪炜 张晶 郭静霞 崔恩博 刘立明 刘庆峰 程炳立 马洪滨 付体权
作者单位：100039 北京，解放军第三○二医院临检中心(王海滨、姜平、毛远丽、鞠连才、刘佳、李永利、刘振红、杨静、刘志国、洪炜、张晶、郭静霞、崔恩博、刘立明、刘庆峰、程炳立、马洪滨、付体权)，SARS病区(曾珍、范荣)
传染性非典型肺炎（SARS）患者具有许多特征性的临床表现，如高热、全身中毒症状起病，发病后血循环中的淋巴细胞绝对数量随病情加重而显著下降，血清免疫球蛋白IgG和IgA含量进行性降低以及年长患者重症SARS发生率及病死率较高等特点［1］。SARS可能是一种由病毒“超抗原”引起的“急性免疫损伤性疾病”；免疫损伤和免疫清除的相互消长，可能是影响SARS病程发展的重要因素。红细胞膜表达有数量众多的补体一型受体（CR1）［2］，是机体黏附、运输及辅助清除循环免疫复合物等免疫产物的重要物质［3］，同时也是红细胞具有天然免疫黏附现象的主要物质基础［4］。本文对解放军第三○二医院住院确诊65例SARS病例及27例疑似病例的红细胞天然免疫黏附功能（EIIAF）进行动态研究。现报道如下。
一、对象与方法
1．对象：（1）SARS患者：均为2003年3月至6月在解放军第三○二医院临床确诊的患者，共65例。其中男29例，女36例，年龄为10~74岁，平均年龄为27.8岁。诊断依据卫生部新颁布
的SARS临床诊断标准，疑似病例27例。（2）其他呼吸道传染病对照18例，其中，麻疹8例，风疹6例，流行性腮腺炎4例，相应血清IgM抗体阳性确诊。（3）合并糖尿病的SARS患者1例，合并慢性肝炎的SARS患者2例。正常对照组50例来自本院输血科正常献血员。
2．病情分期：根据患者病情严重程度及缺氧程度将SARS患者分为如下6期。（1）发病初期：初始发病，中度发热、全身不适，尚无肺部影像学变化及呼吸困难等症状。（2）急性期：高热不退、呼吸急促，淋巴细胞绝对值下降并出现肺部阴影，使用激素治疗。（3）进展期：高热不退、双肺炎症病变，呼吸困难，吸氧3~5 L/min，血气PO2下降在60 ~80 mm Hg（1 mm Hg = 0.133 kPa）之间，淋巴细胞绝对值下降到正常水平的一半以下。（4）极期：低氧血症，血气PO2低于60 mm Hg，激素治疗效果较差，双肺炎性渗出较重，开始出现急性成人呼吸窘迫综合征(ARDS)，死亡，多脏器功能损害（MOFS）。（5）恢复前期：肺部阴影明显吸收，血气PO2低于60 mm Hg回升到80 mm Hg以上，病人自我感觉明显好转。（6）恢复期：肺部炎症完全消失，血气PO2恢复至正常水平。外周血淋巴细胞绝对数恢复到正常水平和接近正常水平。
3．EIIAF快速检测方法：枸橼酸钠抗凝全血2 ml，取自肘静脉，1 500 r/min水平离心5 min，取100 μl病人血浆和1 μl沉淀的红细胞，直接加到150 μl新鲜配制的定量靶细胞悬液中，混匀，37℃，水浴30 min。加200 μl固定缓冲液，轻轻混匀，5 min后阅片。阅片要求：取混匀液150 μl加50 μl吉氏染液，悬浮涂片（玻片的2/3），取四个角和中心五区阅片，每区阅读20个靶细胞，结合5个及以上红细胞的靶细胞为一个黏附单位，计算黏附率。
4．血细胞分类：采用ACL7000血细胞分析仪进行血细胞计数及分类，采用全自动血沉仪进行血沉测定。
5．统计学分析：使用Excel计算机软件，数据用 ±s表示。采用平均值的成对二样本分析t检验。
二、结果
1．SARS急性期EIIAF的变化：65例确诊的SARS患者，在起病3 d内即出现EIIAF的显著下降，EIIAF平均以10％～30%/d的速度下降。而风疹、麻疹及流行性腮腺炎等患者，其EIIAF无前述典型变化。
2．EIIAF与SARS病情发展的关系(表1)：在进展期和极期的SARS患者，其EIIAF下降到较低水平。SARS患者在死亡前其EIIAF接近消失(表1)。
表1 SARS急性期、恢复期、死亡、疑似病例与正常人群的比较( ±s,%)
SARS分期
例数
EIIAF
P值
急性期
65
31±14
<0.001
恢复期
37
67±19
>0.05
死亡
4
6±4
<0.001
疑似病例（非SARS）
21
56±15
>0.05
健康人群
50
61±16
注：*与健康人群比较
3．EIIAF与淋巴细胞绝对值的比较：研究表明，SARS患者EIIAF的变化与淋巴细胞绝对值明显相关（r=0.55），大多重症SARS患者的EIIAF变化与淋巴细胞绝对数量的变化基本同步，但恢复期患者的EIIAF回升时间亦早于淋巴细胞绝对值恢复。
4．EIIAF与血沉变化的比较：临床研究发现，重症SARS患者的病情变化与血沉密切相关，病情重者血沉明显增快。对13例重症SARS患者的血沉结果与其EIIAF变化进行相关比较表明，EIIAF的下降与血沉的升高显著负相关（r=-0.54）。
5．SARS疑似病例EIIAF的变化特点：对27例疑似SARS发热患者的EIIAF进行动态检测，表明，5例EIIAF进行性下降的疑似病例，全部临床确诊为SARS。而21例EIIAF无显著变化的发热
患者则全部排除诊断。
6．SARS患者合并其他疾病时其EIIAF的变化特点：1例合并糖尿病的SARS患者其EIIAF持续处于正常人平均水平，但临床病情较重，进入临床恢复期后其EIIAF却较以前显著下降， 2例合并慢性肝炎的SARS患者其EIIAF持续表现为低水平但病情一直较轻。
目前虽然已明确SARS的病原体是新型冠状病毒［5］，国内业已研制出能够应用于临床检测的SARS病毒抗体检测试剂盒，为SARS的进一步确诊提供重要帮助，但SARS病情发展快速，年长者病死率高，SARS抗体的出现似与病情的缓解无明显关系。因此研究评估SARS病情变化的检测指标，对临床治疗有重要的指导意义。成熟红细胞表达有数量众多的CD35/CR1、CD44、CD58及IL-8R等物质，在辅助机体免疫清除（CR1）、调节炎症反应强度（CD44、IL-8R）及维持整体免疫功能的稳定等方面具有非常重要的作用［6］，因此研究红细胞的黏附、辅助清除病原的功能状况，对判断SARS病情发展变化具有重要价值。
本文研究结果表明，SARS患者EIIAF的变化与SARS患者的血沉显著负相关，与其淋巴细胞绝对值的变化显著正相关，提示SARS是以免疫损伤和免疫清除相互消长的疾病，这一推测支持“SARS存在相关抗体”的研究报道［7］。因此，SARS患者机体免疫反应产物的积聚及其量的变化与临床病情严重程度密切相关。风疹、麻疹及流行性腮腺炎等呼吸道传染病无SARS典型的EIIAF变化，除提示二者发病机制不同外，同时对疑似病例的排除有重要帮助。SARS患者合并糖尿病后病情迁延较重而EIIAF变化不显著，合并慢性肝炎者其EIIAF处于低水平但病情较轻，提示影响SARS病情发展的因素较多，值得深入研究。
参考文献
1 Zhao ZW, Zhang FC, Xu M, et al. The analysis of 190 cases of SARS in Guangzhou. Natl Med J China, 2003, 83:713－718.
赵子文，张复春，许敏，等. 广州地区2003年春季传染性非典型肺炎190例临床分析.中华医学杂志，2003,83:713－718.
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6 De Winter RJ, Manten A, Se Jong YP, et al. Interleukin8 released after acute myocardial infarction is mainly bound to erythrocytes. Heart, 1997, 78 : 598－602.
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程云,郑宇,陈昊.严重急性呼吸道综合征病人血清中SARS相关抗体的发现和分析.中华微生物学和免疫学杂志,2003,23:325－326.
